کروماتوگرافی UPLC

UPLC یا کروماتوگرافی مایع با عملکرد فوق‌العاده چیست؟

UPLC (Ultra Performance Liquid Chromatography) یا کروماتوگرافی مایع با عملکرد فوق‌العاده، یک تکنیک مدرن در حوزه کروماتوگرافی مایع است که جهت‌گیری جدیدی به این فناوری داده است.
UPLC به طور عمده در سه زمینه نسبت به HPLC (کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا) برتری دارد: سرعت بیشتر، وضوح بالاتر و حساسیت بالاتر. این فناوری با استفاده از ذراتی با قطر کمتر از ۲ میکرون (μm)، جداسازی‌هایی با کیفیت بهتر، زمان کمتر و حساسیت بالاتر نسبت به HPLC ممکن می‌سازد.

در قرن بیست و یکم، صنایع داروسازی به دنبال روش‌های اقتصادی‌تر و کوتاه‌تر کردن زمان توسعه داروها هستند. UPLC با ارائه تحلیل‌های سریع‌تر و دقیق‌تر، نقش مهمی در بهبود کیفیت محصولات دارویی و کارایی آزمایشگاه‌های تحلیلی ایفا می‌کند.

جداسازی و اندازه‌گیری در UPLC تحت فشار بسیار بالا (تا 100 MPa) انجام می‌شود. برخلاف HPLC، این فشار بالا تأثیر منفی بر ستون و سایر اجزای سیستم ندارد و مصرف حلال در UPLC به طور محسوسی کمتر است.

اجزای اصلی سیستم UPLC

۱. تزریق نمونه

در UPLC، تزریق نمونه اهمیت زیادی دارد. شیرهای تزریق معمولی (دستی یا خودکار) برای کار در فشار بالا مناسب نیستند، بنابراین تزریق باید بدون پالس و با حداقل حجم جارو شده انجام شود تا از گسترش باند جلوگیری شود.
تزریق‌های کم‌حجم و سریع باعث افزایش حساسیت و بهره‌وری دستگاه می‌شوند. برای نمونه‌های بیولوژیکی، روش‌های تزریق مستقیم نیز وجود دارد.

۲. ستون‌های UPLC

افزایش وضوح در ستون‌هایی با ذرات ۱.۷ میکرومتر به دلیل راندمان بالاتر حاصل می‌شود. برای این منظور چهار نوع فاز پیوندی در دسترس هستند:

ACQUITY UPLC BEH C8 (ستون آلکیل با زنجیره مستقیم)
ACQUITY UPLC BEH C18 (ستون آلکیل با زنجیره مستقیم)
ACQUITY UPLC BEH Shield RP18 (ستون با گروه قطبی تعبیه شده)
ACQUITY UPLC BEH Phenyl (ستون فنیل متصل به گروه سیلیل با زنجیره آلکیل C6)

هر یک از این ستون‌ها ویژگی‌های متفاوتی از نظر آبگریزی، فعالیت سیلانول، پایداری هیدرولیتیکی و تعامل شیمیایی با آنالیت‌ها ارائه می‌کنند.
ستون‌های C8 و C18 به دلیل محدوده وسیع pH و پایداری شیمیایی بالا، انتخاب‌های جهانی برای بیشتر تحلیل‌های UPLC هستند. ستون‌های Shield RP18 و Phenyl نیز گزینش‌پذیری بیشتری در جداسازی نمونه‌ها فراهم می‌کنند.

برای کاربردهای مختلف:

ستون با قطر داخلی ۲.۱ میلی‌متر رایج است.
طول ستون ۵۰ میلی‌متر برای تحلیل‌های سریع و طول ۱۰۰ میلی‌متر برای وضوح بیشتر استفاده می‌شود.

استفاده از ذرات ۱.۷ میکرومتری باعث باریک‌تر شدن پیک‌ها (عرض در نیم‌ارتفاع کمتر از یک ثانیه) شده که نیاز به آشکارسازهایی با نرخ نمونه‌برداری بالا و حجم سلول کم برای حفظ کارایی جداسازی دارد.

۳. آشکارسازها

UPLC عمدتاً از آشکارسازهای UV/Visible برای شناسایی آنالیت‌ها استفاده می‌کند. حساسیت این آشکارسازها بر اساس میزان جذب نور توسط نمونه است.
در UPLC، به دلیل کاهش پراکندگی کروماتوگرافی و افزایش غلظت پیک، حساسیت آشکارسازی به طور قابل توجهی نسبت به HPLC بهبود یافته است. همچنین در ترکیب با سیستم‌های آشکارساز MS، کارایی و قدرت تشخیص بسیار بالاتری ایجاد می‌شود.

ساختار سیستم ACQUITY UPLC

مدیر حلال دودویی: شامل دو پمپ مجزا برای ایجاد گرادیان باینری با فشار حداکثر ۱۵۰۰۰ psi
مدیر نمونه: با فناوری تزریق با حداقل پراکندگی و زمان تزریق بسیار سریع (۲۵ ثانیه بدون شستشو، ۶۰ ثانیه با شستشوی دوگانه)
بخاری ستون: قابلیت گرم‌کردن ستون تا دمای ۶۵ درجه سانتی‌گراد
سازمان‌دهنده نمونه: قابلیت تزریق تا ۲۲ صفحه میکروتیتر
طراحی Pivot-out: برای اتصال مستقیم خروجی ستون به ورودی آشکارساز MS و به حداقل رساندن پراکندگی

خرید، مشاوره و خدمات دستگاه UPLC

شرکت آروین طیف تجهیز به عنوان نماینده رسمی برترین برندهای تولیدکننده دستگاه‌های UPLC، از جمله AGILENT (اجیلنت)، آماده ارائه خدمات مشاوره تخصصی، فروش دستگاه‌های نو و دست دوم، تحویل سریع و خدمات پس از فروش معتبر می‌باشد.

نمایش بیشتر- بستن